點(diǎn)擊查看：2014檢驗(yàn)技師考試檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識匯總
人巨噬細(xì)胞可從外周血或經(jīng)斑蝥激發(fā)的皮皰液中獲取，也可從肺灌洗液或患者腹膜透析液中分離，但操作繁鎖，得量不多。許多實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行基礎(chǔ)或配合臨床研究巨噬細(xì)胞功能及其與疾病的關(guān)系、或篩檢免疫增強(qiáng)藥物和探討其作用機(jī)制時(shí)，常選用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為研究對象，常用的檢測方法如下。
(一)炭粒廓清試驗(yàn)
正常小鼠肝中枯否細(xì)胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細(xì)胞約吞噬清除10%炭粒，據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時(shí)間反復(fù)取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細(xì)胞的功能。
(二)吞噬功能的檢測
巨噬細(xì)胞具有較強(qiáng)的吞噬功能，實(shí)驗(yàn)室常用比細(xì)菌大的細(xì)胞性抗原作為被吞噬顆粒，如雞紅細(xì)胞。其檢測原理是將受檢細(xì)胞與適量的顆�？乖旌虾�，置37℃保溫0.5～1h，其間時(shí)加振搖，最后離心取測定細(xì)胞制成涂片，染色鏡檢，分別計(jì)數(shù)出吞噬百分比和吞噬指數(shù)。各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自己的條件建立正常參考值。
(三)巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測定
巨噬細(xì)胞富含溶酶體酶，如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、溶菌酶等，測定這些酶的活性也是衡量巨噬細(xì)胞功能的實(shí)用指標(biāo)之一。
1.酸磷酸酶的測定
(1)硝酸鉛法：本法優(yōu)點(diǎn)是用普通試劑，價(jià)格便宜，一般實(shí)驗(yàn)室均有條件做，封片后可較長時(shí)間保存，并可用電子顯微鏡研究觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。缺點(diǎn)是細(xì)胞必需固定，而且固定條件要求嚴(yán)格，如處理不當(dāng)酶活性易消失，反應(yīng)步驟也較多。
該法基本原理是在適當(dāng)?shù)拿感詶l件下，巨噬細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸鈉水解成磷酸鹽后，后者與硝酸鉛反應(yīng)產(chǎn)生磷酸鉛，而磷酸鉛再與硫酸銨反應(yīng)則形成黑色硫化鉛，沉積在胞漿內(nèi)酸所在處，顯示棕黑色顆粒。酶活性強(qiáng)弱可根據(jù)顆粒的數(shù)量和粗細(xì)不同而分級判斷，顆粒數(shù)量少則細(xì)的為+，顆粒多而粗的為++，顆粒很多且很粗的為+++。
(2)偶氮法：本法操作簡便，反應(yīng)液中的底物α-萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸鹽，而萘酚結(jié)構(gòu)中的羥基(-OH)鄰近的活潑碳原子，立即與偶氮染料起反應(yīng)，而產(chǎn)生鮮艷的棕色沉積在酶所在處，缺點(diǎn)是封片后保存時(shí)間短。
2.非特異性酶的測定該酶比較穩(wěn)定，酶活性喪失較慢，細(xì)胞經(jīng)涂片干燥，置室溫至少可保存半天至一天，因此特別有利于臨床檢驗(yàn)室采用。
常用α-萘醋酸法，該酶可將-萘醋酸分解成萘酚和醋酸，萘酚迅速與偶染料結(jié)合，形成有色反應(yīng)物而沉積。
(四)巨噬細(xì)胞促凝血活性測定
激活巨噬細(xì)胞可產(chǎn)生一種與膜結(jié)合的凝血活性因子，加速正常血漿的凝固，為此取已經(jīng)37℃預(yù)溫的正常兔血漿和CaC12混合液，加入經(jīng)粘附單層巨噬細(xì)胞的試管中，移置37℃，即時(shí)記錄血漿凝固時(shí)間。實(shí)驗(yàn)證明當(dāng)巨噬細(xì)胞與LPS、腫瘤相關(guān)抗原或HbsAg等溫育后，可見血漿凝固時(shí)間明顯縮短。本法穩(wěn)定方便，也是檢測不同疾病患者巨噬細(xì)胞功能的指標(biāo)之一。
相關(guān)推薦：
2014年全國衛(wèi)生資格考試報(bào)考指南
2014檢驗(yàn)主管技師檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識點(diǎn)匯總
2014年臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師模擬試題試題匯總
