2016年執(zhí)業(yè)藥師《中藥化學(xué)》沖刺精華講義(7)

第三節(jié)　提取與分離

　　一、提取

　　黃酮苷類以及極性稍大的苷元(如羥基黃酮、雙黃酮、橙酮、查耳酮等)，一般可用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、水或某些極性較大的混合溶劑進(jìn)行提取。其中用得最多的是甲醇-水(1：1)或甲醇。一些多糖苷類則可以用沸水提取。在提取花青素類化合物時，可加入少量酸(如0.1%鹽酸)。但提取一般黃酮苷類成分時，則應(yīng)當(dāng)慎用，以免發(fā)生酸水解反應(yīng)。為了避免在提取過程中黃酮苷類發(fā)生水解，也可按常規(guī)提取苷的方法事先破壞酶的活性。大多數(shù)黃酮苷元宜用極性較小的溶劑，如用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等提取，而對多甲氧基黃酮的游離苷元，甚至可用苯進(jìn)行提取。

　　對得到的粗提取物可進(jìn)行精制處理，常用的方法有：

　　(一)溶劑萃取法

　　根據(jù)黃酮類化合物極性的大小分別萃取。一般的黃酮苷元可以選擇氯仿或者乙醚進(jìn)行萃取，單糖苷可以選擇乙酸乙酯進(jìn)行萃取，多糖苷可以選擇水飽和的正丁醇來萃取。

　　(二)堿提取酸沉淀法

　　堿提取酸沉淀法對有酸性的游離的黃酮苷元都是合適的，因?yàn)橛坞x的黃酮苷元具有親脂性，由于有酚羥基顯酸性，因此可以溶解在堿水中，當(dāng)用堿水提取后，再加入酸，能夠恢復(fù)為原來的游離的狀態(tài)，具有親脂性，在酸水中不溶解而形成沉淀。

　　黃酮苷類雖有一定極性，可溶于水，但卻難溶于酸性水，易溶于堿性水，故可用堿性水提取，再將堿水提取液調(diào)成酸性，黃酮苷類即可沉淀析出。此法簡便易行，如蘆丁、橙皮苷、黃芩苷的提取都采用了這個方法。

　　在用堿酸法進(jìn)行提取純化時，應(yīng)當(dāng)注意所用堿液濃度不宜過高，以免在強(qiáng)堿性下，尤其加熱時破壞黃酮母核。在加酸酸化時，酸性也不宜過強(qiáng)，以免生成 鹽，導(dǎo)致析出的黃酮類化合物又重新溶解，降低產(chǎn)品收率。當(dāng)藥材中含有大量果膠、黏液等水溶性雜質(zhì)時(如花、果類藥材)，宜用石灰乳或石灰水代替其他堿性水溶液進(jìn)行提取，以使上述含羧基的雜質(zhì)生成鈣鹽沉淀，不被溶出。這將有利于黃酮類化合物的純化處理。

　　(三)炭粉吸附法

　　主要適于黃酮苷類的精制，大部分黃酮苷類可用7%酚-水洗下。洗脫液經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮后，再用乙醚振搖除去殘留的酚，余下水層減壓濃縮即得較純的黃酮苷類成分。

　　二、分離

　　(一)柱色譜法

　　分離黃酮類化合物常用的吸附劑或載體有硅膠、聚酰胺、葡聚糖凝膠及纖維素粉等。

　　1.硅膠柱色譜

　　此法應(yīng)用范圍最廣，按照黃酮類化合物極性的大小先后洗脫，達(dá)到分離的目的。主要適于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及高度甲基化(或乙醚化)的黃酮及黃酮醇類。

　　2.聚酰胺柱色譜

　　對分離黃酮類化合物來說，聚酰胺是較為理想的吸附劑。其吸附強(qiáng)度主要取決于黃酮類化合物分子中羥基的數(shù)目與位置及溶劑與黃酮類化合物或與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小。聚酰胺柱色譜可用于分離各種類型的黃酮類化合物，包括苷及苷元、查耳酮與二氫黃酮等。黃酮類化合物從聚酰胺柱上洗脫時有下述規(guī)律：

　　(1)苷元相同，洗脫先后順序一般是：叁糖苷，雙糖苷，單糖苷，苷元。

　　(2)母核上增加羥基，洗脫速度即相應(yīng)減慢。

　　(3)不同類型黃酮化合物，先后流出順序一般是：異黃酮，二氫黃酮醇，黃酮，黃酮醇。

　　(4)分子中芳香核、共軛雙鍵多者易被吸附，故查耳酮往往比相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。

　　3.葡聚糖凝膠(Sephadex gel)柱色譜

　　對于黃酮類化合物的分離，主要用兩種型號的凝膠：Sephadex-G型及Sephadex-LH20型。用葡聚糖凝膠分離黃酮類化合物的機(jī)理是：

　　分離游離黃酮時，主要靠吸附作用。凝膠對黃酮類化合物的吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目，數(shù)目越多，越難洗脫。但分離黃酮苷時，則分子篩的性質(zhì)起主導(dǎo)作用。在洗脫時，黃酮苷類大體上是按分子量由大到小的順序流出柱體。

　　(二)pH梯度萃取法

　　pH梯度萃取法適合于酸性強(qiáng)弱不同的黃酮苷元的分離。根據(jù)黃酮類苷元酚羥基數(shù)目及位置不同其酸性強(qiáng)弱也不同的性質(zhì)，可以將混合物溶于有機(jī)溶劑(如乙醚)后，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%NaOH及4%NaOH溶液萃取，來達(dá)到分離的目的。一般規(guī)律大致如下：

　　7,4′-二羥基酸性最強(qiáng)，可以溶于5%NaHCO3，其次是含有7或4′-羥基可以溶于5%Na2CO3，然后是含有一般酚羥基可以溶于0.2%NaOH溶液中，最后是含有5-羥基只能溶解在4%NaOH溶液中。

　　(三) 根據(jù)分子中某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離

　　在黃酮類成分的混合物中，具有鄰二酚羥基的成分與無此結(jié)構(gòu)的成分，性質(zhì)不同，可以進(jìn)行分離。

　　1.鉛鹽沉淀法

　　有鄰二酚羥基的成分可被乙酸鉛沉淀，不具有鄰二酚羥基的成分可被堿式乙酸鉛沉淀，據(jù)此可將兩類成分分離。

　　2.硼酸絡(luò)合法

　　具有鄰二酚羥基的黃酮可與硼酸絡(luò)合，生成物易溶于水，借此也可與不具上述結(jié)構(gòu)的黃酮類化合物相互分離。

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