2014檢驗主管技師輔導：單向擴散試驗

　　單向擴散試驗：瓊脂內(nèi)混入抗體，待測抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴散，如抗原和相應抗體結(jié)合，則形成沉淀環(huán)。

　　1、試管法：將一定量的抗體混入0.7%瓊脂糖溶液中，注入小試管內(nèi)，上層加抗原溶液使待測抗原在凝膠中自由擴散，在抗原抗體比例恰當位置形成沉淀環(huán)。

　　2、平板法：是將抗體或抗血清混入0.9%瓊脂糖內(nèi)，未凝固前傾注成平板，然后在上打孔，將抗原加入孔中，放37℃讓其自由擴散，24～48h后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán)，測定環(huán)的直徑或面積計算標本中待測抗原的濃度。有兩種計算方法：l)Mancini曲線：適用大分子抗原的和長時間擴散(>48h)的結(jié)果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關(guān)系c/d2=k.(其中c為抗原濃度d為沉淀環(huán)直徑k為常數(shù))

　　3、單向擴散試驗檢測時的注意點：

　　(1)抗血清必須特異性強、效價高、親和力強，在良好條件下保存。

　　(2)每次測定都必須作標準曲線。

　　(3)每次測定時必須用質(zhì)控血清作質(zhì)控。

　　(4)注意雙環(huán)現(xiàn)象(出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分)。

　　(5)應用單克隆抗體測量多態(tài)性抗原時，測定值偏低;用多克隆抗體測量單克隆病時，測定值偏高。

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